Доктор Олег Алексеев, исследователь. Отделение медицинских бионаук/патологии. Университет Умео.
ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ IN VITRO ТРИЭТИЛЦИТРАТА И GT-ПЕПТИДА-10 В ОТНОШЕНИИ PROPIONIBACTERIUM ACNES, PROPIONIBACTERIUM GRANULOSUM, PROPIONIBACTERIUM AVIDUM, А ТАКЖЕ ОБРАЗОВАНИЯ И РАСПЫЛЕНИЯ БИОПЛЕНКИ P.ACNES
Распыление биопленки Propionibacterium acnes при различных видах кожных заболеваний и их уничтожение с помощью средства, не являющегося антибиотиком in vitro. Акне Дей. Неаполь, 17 октября 2014 г.
«ДЖЕНЕРАЛ ТОПИКС с.р.л.» - Лок. Сантигаро, 32 - 25010 Сан-Феличе дель Бенако (BS) - Италия
Телефон: + 39-0365-529111 - телефакс + 39-0365-522619
E-mail: info@general-topics.com - ВЕБ-сайт: www.general-topics.com
Цель исследования

Целью проведенных исследований было изучение эффектов двух антимикробных веществ, триэтилцитрата и GT-Пептида-10, на трех бактериальных штаммах, которые обычно находятся на коже человека, а именно Propionibacterium acnes, Propionibacterium granulosum, Propionibacterium avidum.

Более того, изучался эффект обоих веществ на образование и распыление биопленки P.acnes. Также изучалось влияние данных веществ на характерное состояние роста, предположительно влияющее на развитие обыкновенных угрей.
Материалы и методы

MIC (минимальная концентрация антимикробного средства, которая ингибирует рост микроорганизма) как отдельных веществ, так и смеси, для всех трех указанных типов бактерий определяли с помощью экспериментов в отношении роста и измерения оптической плотности культур при 590 нм.

Влияние веществ на ранее существовавшие биопленки P.acnes было изучено с помощью модифицированного анализа с использованием кристаллического фиолетового красителя, как было описано ранее.

Анализы жизнеспособности проводили с использованием набора для определения бактериальной жизнеспособности LIVE/DEAD® BacLight (LifeSciences) и микроскопического анализа биопленок, которые обрабатывались триэтилцитратом и GT-пептидом-10.
Результаты

В каждом эксперименте три бактерии показали особую чувствительность к обоим антимикробным веществам. MIC для GT-пептид-10 для P.acnes и P.granutosum составила 2,5 мкл/мл, в то время как рост P.avidum подавлялся при концентрациях 6-7 мкл/мл (Рис. 1). Для сравнения, MIC
для триэтилцитрата для P.acnes, P.granutosum и P.avidum составляла 3%, 2% и 3% соответственно
(Рис. 2).
Сочетание обоих веществ (1% ТЕС с увеличивающимися концентрациями пептида) показало наличие синергетического эффекта, который понижает MIC пептида для P.acnes, P.granutosum и P.avidum до 1,5 мкл/мл, 1 мкл/мл и 5 мкл/мл соответственно (Рис. 3, a-c).
Поскольку образование биопленки с помощью P.acnes требует роста бактериальной культуры, она была подавлена до такого же уровня, что и рост. Для изучения влияния обоих веществ на ранее существовавшие биопленки P.acnes, 6-дневные биопленки обрабатывали различными концентрациями в течение 24 часов. Распыление было задокументировано с помощью кристаллического фиолетового красителя.

Ни одно из отдельных веществ (С max триэтилцитрата: 4%, С max GT Пептида-10: 2,5 мкл/мл), ни комбинация обоих веществ (4% триэтилцитрата, C max GT Пептида-10: 50 мкл/мл = 20x MIC) не влияют на целостность биопленки и не приводят к распылению биопленки (рис. 4, а-с). Для сравнения, ДНКаза I (дизоксирибонуклеаза I, фермент), который служил в качестве положительного контроля в этом эксперименте, привел к почти полному распылению биопленки (Рис. 4, b и c).
Жизнеспособность одиночных бактериальных клеток в биопленках, обработанных обоими веществами в течение 24 часов, уменьшилась в зависимости от дозы, хотя летальность варьировалась от эксперимента к эксперименту.

4% триэтилцитрат убил 67% всех бактерий, в то время как GT Пептид-10
в концентрации 50 мкл/мл привел только к 50% мертвых клеток. Соответствуя предыдущим результатам, сочетание обоих соединений (C max триэтилцитрата: 4%, С max GT пептида-10: 50 мкл/мл = 20x MIC) показало наличие синергетического эффекта, который привел к получению 92% мертвых бактерий в биопленках P.acnes (Рис. 5).
Выводы

И триэтилцитрат, и GT Пептид-10 успешно ингибировали рост трех различных видов Propionibacterium, которые обычно находятся на коже человека, а также образование биопленки P.acnes, в зависимости от дозы.

На целостность ранее существовавших биопленок P.acnes не оказали воздействия ни отдельные соединения, ни сочетания обоих соединений. Однако оба соединения, особенно в комбинации, уничтожили значительное число бактериальных клеток в биопленке. Таким образом, сочетание триэтилцитрата и GT пептида-10 эффективно предотвращает образование или рост впервые обнаруженных биопленок P.acnes.

Кроме того, на основании наших данных мы приходим к выводу, что высокие концентрации триэтилцитрата (> 3%) обладают бактерицидным действием, в то время как GT пептид-10 обладает бактериостатическими свойствами и, предположительно, действует на делящиеся клетки.